產(chǎn)品名稱：原代腸癌條件重編程培養(yǎng)基(Human intestine Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說明：原代腸癌條件重編程培養(yǎng)基（Human intestine Carcinoma Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進人源腸癌原代細胞體外生長而開發(fā)的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質和一定量的血清。培養(yǎng)基基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO。、37℃培養(yǎng)箱中平衡時，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以理想人源腸癌原代細胞體外培養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進體外人源腸癌原代細胞的生長。

產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結果宇臨床數(shù)據(jù)接近

使用說明：
?使用前準備
(1) 15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min；提前30min從4 ℃冰箱取出原代細胞培養(yǎng)基平衡至室溫。
(2)γ 射線照射過的NIH-3T3細胞（40 Gy輻照）。
?腸癌原代上皮細胞培養(yǎng)
（1）獲取的人源腸癌原代細胞，按照表1中細胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中，加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞（添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1和表2所示）。
（2）原代細胞初次接種后2-3天勿動（利于細胞貼壁），培養(yǎng)過程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細胞未長滿時可進行半換液，鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時，適量補充γ射線輻照后的3T3細胞（一般補加初始數(shù)目的一半）。
注：針對實體瘤樣本，細胞粒徑大于12微米進行計數(shù);倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞;對于增殖較快細胞，可以綜合倍增時間、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來估算接種的細胞數(shù)量;表格供參考，具體實驗具體對待。
?腸癌原代上皮傳代
（1）鏡下觀察細胞形成克隆，且匯合度85~95%時即可傳代。
（2）培養(yǎng)箱中取出細胞，棄舊培養(yǎng)液，0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡，再加入適量0.05%胰酶，37℃孵育，2~5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側面，顯微鏡下觀察細胞消化情況。
（3）細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養(yǎng)基終止消化，并將細胞轉移至離心管中，1500 rpm,3min。
（4）棄上清，以1~5mL相對應的原代細胞培養(yǎng)基重懸細胞，活細胞計數(shù)，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板，加入γ射線輻照后的NIH-3T3細胞（不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1、表2所示）。
（5）補加腸癌培養(yǎng)基至所需體積，十字交叉混勻，培養(yǎng)容器75%表面消毒后置培養(yǎng)箱，37℃、5%CO₂條件培養(yǎng)。其他步驟同上。
注意事項：

1. 本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。

2. 使用產(chǎn)品時應注意無菌操作，避免污染。

3. 本產(chǎn)品中含有一定比例的血清和原代細胞專用抗生素，如無特殊需要不用額外再添加血清和抗生素，可直接使用。

4. 樣本需為腫瘤組織、內(nèi)鏡組織，且腫瘤細胞比例越高（>50%），培養(yǎng)成功率越高。

5. 為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。

6. 傳代消化時切記不要消化過度，不宜超過5min，對細胞造成損傷，影響細胞狀態(tài)。

7. 請于保質期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質期，必須放棄使用。

8. 本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。