你知道細胞表面染色實驗操作流程是什么嗎?讓我們一起來看看吧!
一、細胞計數(shù)
將培養(yǎng)好的細胞收集于15mL離心管并計數(shù);500g離心4min,去上清。
二、制備單細胞懸液
將收集的細胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重懸,400g離心3min,去上清,重復2次;用0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞至濃度1x106個細胞/mL,分配到96孔板中,每孔100μl細胞懸液。
三、阻斷Fc受體
室溫孵育10-20min。
四、一抗孵育
每孔加入稀釋后的一抗溶液100μl,2-8℃反應(yīng)30min。
五、洗滌
400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍。
六、二抗孵育
對于非熒光染料直標抗體,加入100μl熒光二抗重懸,避光2-8℃反應(yīng)30min。對于直標抗體直接跳到步驟八。
七、洗滌
400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,離心去上清,重復兩遍。
八、重懸細胞
用200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞,4℃保存,上機分析。
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