完整的Western實(shí)驗(yàn)過程比較長(zhǎng)，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)沒有結(jié)果，或者是顯色后背景高了，背景高，目的蛋白顏色對(duì)比不明顯，要么看不清，圖片展示不理想，更別說(shuō)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析了。顯色背景高的原因有很多: 封閉問題，洗脫問題，一抗二抗問題等。其中最xian著的就是封閉問題。

最常見的封閉就是脫脂奶粉和牛血清白蛋白（BSA），當(dāng)然還有 血清 ，魚皮明膠， 聚乙烯吡咯烷酮，封閉液 。我們到底應(yīng)該選擇哪種封閉液？怎么選擇呢？讓我們一起來(lái)看看不同的封閉液的優(yōu)缺點(diǎn)吧！

一、脫脂奶粉

最pian宜而且最好買的封閉劑就屬脫脂奶粉了。通常封閉液的濃度為 2.5-5% （w/v）。但值得注意的是，脫脂奶粉是許多種蛋白質(zhì)的混合物，其中含有酪蛋白，是一種磷蛋白。如果你的目標(biāo)蛋白是磷蛋白的話，千萬(wàn)不要選擇脫脂奶粉，否則會(huì)有很多背景信號(hào)。即使你的目標(biāo)蛋白不是磷蛋白，因?yàn)槭堑鞍踪|(zhì)的混合物，所以也容易產(chǎn)生較高的背景信號(hào)。

二、牛血清白蛋白(BSA)

牛血清白蛋白是從牛血清中提純之后的一種球蛋白，是除了脫脂奶粉之外，非常常用的封閉劑。通常含有BSA的封閉液的濃度為2-5%（w/v）。但大家也可 以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)改變濃度，因?yàn)閮r(jià)格比較高，所以很多研究人員都是用盡可能低而有效的濃度。雖然BSA不是磷蛋白而且是單一蛋白，但是提純過程中有 可能含有IgG或其他血清蛋白等污染物，這些蛋白都可以和哺乳動(dòng)物抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，會(huì)增加非特異性背景信號(hào) 。

三、血清

血清如胎牛血清FBS含有大量的蛋白質(zhì)，可以用于封閉。但與BSA一樣，它含有免疫球蛋白和血清蛋白，這些蛋白會(huì)和哺乳動(dòng)物抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，增加非特異性背景信號(hào)。而且血清價(jià)格更加昂貴，需要的濃度更高 (5-10 % w/v),因此在WB實(shí)驗(yàn)中血清一般用的較少，它更多地應(yīng)用于免疫組化和免疫熒光實(shí)驗(yàn)中樣本的封閉。

四、魚皮明膠

明膠是膠原蛋白的產(chǎn)物，從冷水魚皮膚中提取出來(lái)的明膠即使在低溫情況下也不會(huì)凝固，通常使用濃度為0.1-5 % (w/v)。與BSA和血清不同，它不含任何血清蛋白，因此不會(huì)和哺乳動(dòng)物抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，這大大降低了非特異性背景信號(hào)。但魚膠含有內(nèi)源生物素，因此不適用于生物素標(biāo)記的抗體系統(tǒng)。

五、聚乙烯吡咯烷酮

PVP 是傳統(tǒng)封閉液的非蛋白質(zhì)性質(zhì)的替代品。雖然早在1993年就有文獻(xiàn)發(fā)表，在封閉技術(shù)上卻是很新的產(chǎn)品。PVP是一種水溶性多聚物，可以很快和硝酸纖維素和PVDF膜結(jié)合。通常使用的濃度在0.5-2%（w/v），而且通常會(huì)和其他封閉劑一起使用。PVP 在用于檢測(cè)較小目標(biāo)蛋白的時(shí)候非常有效。

六、封閉液

商品化封閉液通常含有提純過的蛋白，用這個(gè)封閉液的好處就是你可以確定里面不含有磷蛋白、免疫球蛋白、白蛋白、生物素 等其他封閉液中難以避免的成分。當(dāng)然，價(jià)格也就更貴。每個(gè)商品化封閉液都有自己的Protocol，基本照做就沒問題，而且封閉時(shí)間很快。

相信大家現(xiàn)在對(duì)各種封閉液都有了更全面的了解。總的來(lái)說(shuō)，封閉液的選擇基于三樣事情：抗體、目標(biāo)蛋白和檢測(cè)系統(tǒng)。但是要想找到適合自己目標(biāo)蛋白的封閉液，并不簡(jiǎn)單。除了排出一些很明顯不合適的，剩下的就需要多花點(diǎn)時(shí)間嘗試不同種類、不同濃度的封閉液，才能找到最shi合的。

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